Ударный труд
Трудовой десант

ГОСТ 9.085-78 Жидкости смазочно-охлаждающие Методы испытаний на биостойкость


МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ



Единая система защиты от коррозии и старения

ЖИДКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩИЕ

ГОСТ 9.085-78

Методы испытаний на биостойкость

 

Single corrosion and ageing protection system.
Cooling lubricant. Bioresistance test methods



МКС 19.040
75.100
ОКСТУ 0009

Дата введения 1979-07-01

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. N 1699 дата введения установлена с 01.07.79

Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)

ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в октябре 1988 г. (ИУС 1-89)

Настоящий стандарт распространяется на водосмешиваемые смазочно-охлаждающие жидкости (далее СОЖ) и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий и плесневых грибов.

(Измененная редакция, Изм. N 1).
 

1. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

 

1.1. Сущность метода

Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами бактерий в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.

1.2. Отбор проб

1.2.1. Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ 2517-85 массой 50 г.

1.2.2. Пробами являются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и стерилизации.

1.2.3. Проб должно быть не менее трех.

1.2.4. Виды бактерий

1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов бактерий:

Escherichia coli (Migyla) Castellani and Chalmers;

Mycobacterium phlei Lehman and Neum;

Pseudomonas aeruginosa Migyla;

Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;

Staphylococcus aureus Rosenbach.

Кроме чистых культур допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из испытуемых СОЖ.

1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.

1.2.4.1, 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий производят, как указано в ГОСТ 9.082-77.

1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89 со следующим дополнением:

термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры (30±2) °С*;

электроплитка с закрытой спиралью*;

потенциометр по ГОСТ 9245-79;

горелки газовые*;

цилиндры металлические, полые изготовленные из коррозионно-стойкой стали по ГОСТ 5949-75, внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;

чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336-82 с крышками, низкие, типа ЧБН;

груша резиновая*;

доска для сушки посуды;

аппарат для встряхивания колб и пробирок;

стандарты мутности;

рН-метр лабораторный типа ЛПУ-01, рН-340 или другого типа с погрешностью не более 0,05 рН;

ножницы, пинцеты, скальпели*;

штативы лабораторные*;

бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 9.082-77;

агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 9.082-77;

спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87, высшего сорта;

кислота соляная по ГОСТ 3118-77;

кислота серная по ГОСТ 4204-77;

калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;

натрий углекислый по ГОСТ 83-79, безводный;

(Измененная редакция, Изм. N 1).
__________________
* По документации, утвержденной в установленном порядке.

1.4. Подготовка к испытаниям

1.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.

1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.082-77.

1.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.
 

Таблица 1

Наименование реактивов

Среда

 

1

2

3

4

5

6

 

МПА

Агар индикаторный

Сорокина

Сусло-агар

Чапека-Докса с агаром

Чапека-Докса с агаром без сахарозы

Калий фосфорнокислый однозамещенный, г

-

-

0,5

-

0,7

0,7

Калий фосфорнокислый двузамещенный, г

-

-

1,0

-

0,3

0,3

Магний сернокислый, г

-

-

0,2

-

0,5

0,5

Натрий азотнокислый, г

-

-

-

-

2,0

2,0

Натрий сернокислый, г

-

0,5

-

-

-

-

Калий хлористый, г

-

-

-

-

0,5

0,5

Железо сернокислое, г

-

-

0,01

-

0,01

0,01

Железо лимоннокислое, г

-

0,5

-

-

-

-

Аммоний хлористый, г

-

-

0,1

-

-

-

Спирт этиловый ректификованный, г

-

-

5,0

-

-

-

Сахароза, г

-

-

-

-

30,0

-

Пептон бактериологический, г

-

10,0

-

-

-

-

Агар микробиологический, г

20,0

12,0

-

20,0

20,0

Выщело- ченный 20,0

Мясо-пептонный бульон, смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1)

До 1000

-

-

-

-

-

Сусло пивное, смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1)

-

-

-

До 1000

-

-

Вода дистиллированная, смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1)

-

1000

До 1000

-

До 1000

До 1000

 

1.4.4. Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082-77.

1.4.5. Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в течение суток, с помощью бактериологической петли переносят в отдельные пробирки, содержащие 10 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) водопроводной воды.

1.4.6. Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.

Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1).

1.4.7. Приготовленные суспензии взбалтывают и сливают в равных объемах (1-2 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1)) в стерильную пробирку.

1.4.8. Срок хранения суспензии не более 3 ч.

1.5. Проведение испытаний

1.5.1. Круглую или коническую колбу вместимостью 500 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1), содержащую 200-300 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) среды 1, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (100±2) °С до тех пор, пока среда полностью не расплавится.

Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-50 °С и заражают суспензией смеси бактериальных культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) на 100 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) среды.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

1.5.2. Среду после заражения разливают по 15 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) в чашки Петри.

1.5.3. На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из которых вносят по 0,1 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) испытуемой СОЖ.

1.5.4. Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат при (30±2) °С.

1.5.5. Пробы выдерживают в термостате 24 ч.

1.5.6. Испытания повторяют 3-4 раза.

1.5.7. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из термостата и осматривают.

1.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.2.
 

Таблица 2

Балл

Характеристика балла

0

При осмотре невооруженным глазом наблюдаются большие, четко выраженные зоны отсутствия роста микроорганизмов (зоны ингибирования) вокруг цилиндриков, содержащих СОЖ. Диаметр зоны ингибирования 1,5-2,0 см. Полная бактериостойкость.

I

При осмотре невооруженным глазом заметны зоны отсутствия роста микроорганизмов. Диаметр зоны ингибирования 0,8-1,0 см. Удовлетворительная бактериостойкость.

II

При осмотре невооруженным глазом не наблюдается зон отсутствия роста микроорганизмов. Небактериостойкость СОЖ.

 

1.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.023-74 со следующим дополнением: необходимо осуществлять систематический контроль загрязнения микроорганизмами воздуха в производственных помещениях.

Количество микроорганизмов не должно превышать 5000-7000 кл/мГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1)воздуха.

 

2. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АНАЭРОБНЫХ (СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ) БАКТЕРИЙ

 

2.1. Сущность метода

Сущность метода заключается в способности анаэробных бактерий восстанавливать соединения серы с образованием сероводорода и сульфидов металлов.

Микроорганизмы образуют черные зоны сульфида железа, которые учитываются при оценке бактериостойкости СОЖ.

2.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.

2.2.1. Виды бактерий - культуры представителей рода Desulfovibrio.

Допускается использование ассоциативных культур этих бактерий с представителями других родов - Pseudomonas, Achromobacter и др.

2.3. Аппаратура, материалы и реактивы по п.1.3 со следующим дополнением:

аммоний хлористый по ГОСТ 3773-72;

натрий сернокислый кристаллический по ГОСТ 4171-76;

железо лимоннокислое, кристаллическое, ч.д.а.*;

пептон бактериологический*.
__________________
* По документации, утвержденной в установленном порядке.

2.4. Подготовка к испытаниям - по пп.1.4.1-1.4.4.

2.4.1. Для приготовления бактериальной суспензии используют накопительные культуры сульфатредуцирующих бактерий, выделенные в производственных условиях из пораженных СОЖ.

Для выращивания культуры используют среду 3.

2.4.2. Выращенную культуру в количестве 0,1-0,2 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) переносят пипеткой в отдельные пробирки, содержащие 10 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) водопроводной воды.

2.4.3. Количество бактериальных клеток определяют с помощью камеры Горяева.

Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1).

2.4.4. Срок хранения суспензии-не более 1 ч.

2.5. Проведение испытаний

2.5.1. Испытуемые СОЖ разливают мерной пипеткой по 8-9 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) в стеклянные пробирки, добавляют по 0,5-1 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) суспензии, тщательно перемешивают и закрывают притертыми пробками.

2.5.2. Пробирки помещают в термостат и выдерживают при температуре (30±2) °С в течение 20-24 ч.

2.5.3. По истечении указанного срока проводят заражение среды 2 испытуемой СОЖ. Для этого 1 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) зараженной СОЖ вносят в стерильную пробирку и заливают 10 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) предварительно расплавленной и охлажденной до 40 °С - 45 °С средой 2.

2.5.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в стерильные пробирки вносят 1 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) бактериальной суспензии и 10 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) среды 2.

2.5.5. Пробирки с зараженными пробами и контрольные пробирки закрывают притертыми пробками, перемешивают содержимое и помещают в термостат с температурой (30±2) °С.

2.5.6. Пробирки выдерживают в термостате 4 сут.

2.5.7. По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и осматривают.

2.5.8. Если среда 2 в контрольной пробирке остается бесцветной, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых пробах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.

2.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.3.
 

Таблица 3

Балл

Характеристика балла

0

Цвет индикаторного агара не меняется, что соответствует отсутствию роста сульфатредуцирующих бактерий. Полная бактериостойкость СОЖ.

I

Проявляются единичные черные колонии в индикаторном агаре. Удовлетворительная бактериостойкость СОЖ.

II

По всей толщине индикаторного агара образуются многочисленные черные колонии. Небактериостойкость СОЖ.

 

2.5.8, 2.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).

2.7. Требования безопасности - по п.1.7.
 

3. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

 

3.1. Сущность метода

Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами грибов в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой грибостойкости.

3.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.

3.2.1. Виды грибов

Aspergillus niger van Thieghem;

Chaetomium globosum Kunze;

Cladosporium gossi picola Pidopl ct Deniak;

Cladosporium resinae Albida;

Penicillium chrysogenum Thom;

Penicillium ochro-cloron Biorge;

Trichoderma koningii Oudemans;

Trichoderma viride Pers. ex. Fr;

Torula convoluta Harz;

Cephalosporium acremonium Corda.

3.2.2. Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями.

3.2.1, 3.2.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.2.3. Пересев, выращивание и хранение грибов - по ГОСТ 9.048-89.

3.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.

3.4. Подготовка к испытаниям

3.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.

3.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89.

3.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.

3.4.4. Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048-89, используя грибы, приведенные в п.3.2.1.

3.4.5. Приготовление суспензии спор грибов и контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048-89.

3.5. Проведение испытаний

3.5.1. Коническую колбу вместимостью 500 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1), содержащую среду 5 в количестве 300 г, выдерживают при температуре (100±2) °С на водяной бане до полного расплавления среды.

3.5.2. Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-45 °С и заражают водной суспензией спор грибов, внося последнюю с помощью градуированной пипетки - 2 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) на 100 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) среды.

3.5.3. На застывшую строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 полых металлических цилиндра, в каждый из которых вносят по 0,1 смГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (с Изменением 1) испытательной СОЖ.

3.5.2, 3.5.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.5.4, 3.5.5. (Исключены, Изм. N 1).

3.5.6. Чашки Петри помещают в эксикатор, на дно которого налита дистиллированная вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (28±2) °С.

3.5.7. Пробы выдерживают в термостате 28 сут. Через каждые 7 сут крышку эксикатора приоткрывают на 3 мин для притока воздуха.

3.5.8. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают.

3.6. Оценку грибостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.4.
 

Таблица 4

Балл

Характеристика балла

0

Рост плесневых грибов отсутствует. Полная грибостойкость СОЖ.

I

Рост грибов едва виден. Спорообразование не наблюдается. Удовлетворительная грибостойкость СОЖ.

II

Рост грибов отчетливо виден, появляется спорообразование. Негрибостойкость СОЖ.

 

3.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.048-89.

192019, Россия, Санкт-Петербург,
ул. Седова, д.11А, б/ц «Эврика»